體外哺乳動物細胞染色體畸變試驗儀

實驗目的：

本試驗檢測受試物是否引起培養(yǎng)的哺乳動物細胞染色體畸變強大的功能，以評價受試物致突變的可能性

實驗概述：

在加入和不加入代謝活化系統的條件下明顯，使培養(yǎng)的哺乳動物細胞暴露于受試物中廣泛應用。用中期分裂相阻斷劑（如秋水仙素或秋水仙胺）處理研究成果，使細胞停止在中期分裂相表示，隨后收獲細胞成就，制片效高化，染色生產效率，分析染色體畸變。

大部分的致突變劑導致染色單體型畸變部署安排，偶有染色體型畸變發(fā)生競爭激烈。雖然多倍體的增加可能預示著有染色體數目畸變的可能，但本方法并不適合用于測定染色體的數目畸變效果。

應用范圍

應用于科研學習、農業(yè)、衛(wèi)生改善、教育、霧霾狀態(tài)可吸入顆粒染毒效果研究等各個領域

符合標準：

GB/T 15670.19-2017《農藥登記毒理學試驗方法第19部分：體外哺乳動物細胞染色體畸變試驗》

二、試驗流程

1）細胞培養(yǎng)

選擇合適細胞系推廣開來，在含血清培養(yǎng)基中培養(yǎng)至對數生長期自行開發。

2）受試物處理

設置多個濃度組（需包括細胞毒性評估，如50%生長抑制濃度）

陽性對照（已知誘變劑）

陰性對照（溶劑對照）

3）代謝活化系統（S9混合液）

模擬體內代謝取得顯著成效，用于檢測需代謝激活的致突變物（如加Aroclor 1254誘導的大鼠肝S9）

4）采樣時間

短期處理：1個細胞周期（通常24小時處理方法，含或不含S9）

長期處理：覆蓋多個細胞周期（如48小時）

5）染色體制備

秋水仙素（或秋水仙胺）處理：阻斷中期細胞。

低滲處理（KCI溶液）使細胞膨脹責任。

固定（甲醇：冰醋酸=3：1）后滴片服務，Giemsa染色。

6）鏡檢分析

顯微鏡下觀察至少200個中期分裂相增多，記錄畸變類型和頻率啟用。

三、儀器與試劑

關鍵儀器：

培養(yǎng)箱估算、生物安全柜活動上、離心機、顯微鏡（配備油鏡和圖像分析系統）

染色體自動掃描儀（可選）

主要試劑：

細胞培養(yǎng)基深入各系統、胎牛血清大型。

秋水仙素、Giemsa染液進一步推進、S9混合液不可缺少。